Purification of RgpA from external outer membrane vesicles of Porphyromonas gingivalis

Fecha de publicación: 01/01/2022 Fecha Ahead of Print: 01/09/2022

Autores organización

Diana Marcela Castillo Perdomo

Autor
Yormaris Castillo Romero

Autor
Nathaly Andrea Delgadillo Salgado

Autor
Yineth Neuta Poveda

Autor
Gloria Ines Lafaurie Villamil

Autor
Maria Consuelo Romero Sanchez

Autor
Jaime Eduardo Castellanos Parra

Autor

Grupos de investigación

Grupo de Inmunología celular y molecular Universidad El Bosque (InmuBo)

Investigador

Maria Consuelo Romero Sanchez
Grupo de Virología

Investigador

Jaime Eduardo Castellanos Parra
Unidad de Investigación Básica Oral UIBO

Investigador

Gloria Ines Lafaurie Villamil

Resumen

Introduction: Purification of native gingipains is challenging because these proteases are frequently associated with the cell surface, which affects yield. This study aimed to purify native Arg-gingipain (RgpA) from Porphyromonas gingivalis Outer Membrane Vesicles (OMV). Methods: Native RgpA was purified from P. gingivalis strain ATCC33277 OMV using a strategy including ultracentrifugation, sonication, and successive anionic and cationic fast protein liquid chromatography (FPLC). The presence and purity of the protease were confirmed by SDS-PAGE and detection of protease activity using fluorogenic substrates. Rat antibodies produced against the unique adhesin hemagglutinin (H1) domain of RgpA (amino acids 719–865) were titrated by ELISA at a 1:100 dilution using whole P. gingivalis lysate as an antigen and western blotting to detect a 75 kDa band corresponding to RgpA. Results: Double anionic-cationic FLPC yielded prominent peaks with evident amidolytic gingipain activity of the appropriate molecular weight, as confirmed by western blotting. The final RgpA yield from 1 L of bacterial culture with colony forming unit (CFU) (Log10) 7.4 ± 0.08/mL was of 12.6% (2 mg/mL), with 3.2 FU/µg of amidolytic activity. Conclusions: This protocol allows purification of native RgpA from OMV that retains protease activity. © 2022 The Authors

Datos de la publicación

ISSN/ISSNe:: 1075-9964, 1095-8274
Tipo:: Article
Páginas:: 102647-102647
DOI:: 10.1016/j.anaerobe.2022.102647
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Filiaciones

Castillo DM:: Universidad. Universidad El Bosque, Vicerrectoría de investigaciones, Facultad de Odontología, Unidad de Investigación Básica Oral (UIBO), Av. Carrera 9 No 131A – 02, Bogotá D.C, Colombia
Castillo Y:: Universidad. Universidad El Bosque, Vicerrectoría de investigaciones, Facultad de Odontología, Unidad de Investigación Básica Oral (UIBO), Av. Carrera 9 No 131A – 02, Bogotá D.C, Colombia
Delgadillo NA:: Universidad. Universidad El Bosque, Vicerrectoría de investigaciones, Facultad de Odontología, Unidad de Investigación Básica Oral (UIBO), Av. Carrera 9 No 131A – 02, Bogotá D.C, Colombia
Neuta Y:: Universidad. Universidad El Bosque, Vicerrectoría de investigaciones, Facultad de Odontología, Unidad de Investigación Básica Oral (UIBO), Av. Carrera 9 No 131A – 02, Bogotá D.C, Colombia
Lafaurie GI:: Universidad. Universidad El Bosque, Vicerrectoría de investigaciones, Facultad de Odontología, Unidad de Investigación Básica Oral (UIBO), Av. Carrera 9 No 131A – 02, Bogotá D.C, Colombia
Romero-Sánchez C:: Universidad. Universidad El Bosque, School of Dentistry, Cellular and Molecular Immunilogy Group/INMUBO, Av. Carrera 9 No 131A – 02, Bogotá D.C, Colombia

Hospital Militar Central, Rheumatology and Immunology Department/Clinical Immunology Group/Universidad Militar Nueva Granada, School of Medicine, # 49-00, Bogotá D.C, Colombia
Castellanos JE:: Universidad. Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Odontología, Carrera 30 No. 45-03, Edificio 210, Oficina 301, Bogotá D.C, Colombia

Keywords

Adhesins, Bacterial; Animals; Cysteine Endopeptidases; Gingipain Cysteine Endopeptidases; Hemagglutinins; Porphyromonas gingivalis; Rats; gingipain R; adhesin; cysteine proteinase; hemagglutinin; animal experiment; animal model; anion exchange chromatography; Article; bacterium culture; blood sampling; chemiluminescence immunoassay; colony forming unit; enzyme linked immunosorbent assay; external outer membrane vesicle; fast protein liquid chromatography; indirect ELISA; ion exchange chromatography; male; membrane vesicle; molecular weight; nonhuman; polyacrylamide gel electrophoresis; Porphyromonas gingivalis; rat; transmission electron microscopy; ultracentrifugation; ultrasound; Western blotting; animal; chemistry; metabolism